飼料在收獲、貯存、加工以及運輸等過程中會因各種自然環境因素的影響而使飼料原有養分降低和品質的劣化，嚴重者導致畜禽采食后中毒或死亡^[1-3]。影響飼料品質最重要的因素是霉菌的破壞。各種霉菌在適宜的溫度、濕度和營養環境下迅速生長而造成飼料霉變，其結果是使飼料發熱、結塊、有霉味、甚至改變飼料顏色并產生霉菌毒素^[4-5]。使飼料霉變的霉菌種類很多，主要有田間菌和貯藏菌，而主要的產毒菌是青霉、曲霉和鐮刀菌；毒性較大的毒素主要有黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A等。黃曲霉毒素B₁(aflatoxinB₁，簡稱為AFB₁)是到目前為止所發現的毒性最大的真菌毒素。赭曲霉毒素有七種結構類似的化合物，其中赭曲霉毒素A毒性最大。霉菌毒素的化學結構式如圖1所示。

　　霉菌毒素可通過多種途徑污染食品和飼料，直接或間接進入人類食物鏈，威脅人類健康和生命安全，可引起肝中毒、突變、癌變和免疫抑制等^[6-8]。，沒有其它毒素有像黃曲霉素這樣如此廣泛的毒性，因此世界對它的認識也比較多。影響飼料霉變的因素主要有溫度濕度和飼料貯存時間，根據要求飼料應存放在30℃以下，陰涼、干燥、通風處。本文主要目的是模擬飼料標準的貯存條件和高溫、高濕的貯存條件，比較兩種貯存條件下飼料中霉菌總數及霉菌毒素的變化情況。

　　1 實驗材料與方法

　　1.1實驗材料

　　原料是天津市某飼料廠生產的生長肥育豬用濃縮飼料。按照15-30kg小豬營養的需要進行配制，濃縮料組成及營養水平見表1。

　　1.2樣品處理與實驗方法

　　1.2.1模擬貯藏條件

　　飼料標準存放時溫度要求為<30℃，而一年四季中20~25℃這個溫度范圍持續時間較長，所以模擬飼料標準的貯存條件的溫度設為（22±2)℃，高溫高濕貯存條件溫度設為（30±2)℃；而飼料標準存放時濕度要求為低濕的條件，根據資料得知在濕度為65%時飼料中大部分霉菌開始生長，但生長很慢，濕度為67%~75%時飼料較易發霉，而濕度>75%時飼料迅速發霉，所以模擬飼料標準的貯存條件的濕度設為（65±2)%高溫高濕貯存條件濕度設為（80±2)%。飼料標準貯存條件：溫度設為(22±2)℃；濕度設為（65±2)%。高溫高濕貯存條件：溫度設為(30±2)℃；濕度設為（80±2)%。貯存時間為 8周。

　　1.2.2原料處理

　　將600g濃縮料樣品分成30份，分別裝在培養皿內，置于設定條件下的霉菌培養箱中敞蓋充分曝露，每周進行一次檢測。

　　1.2.3菌總數的檢測

　　①根據GB/T 13092-2006飼料中霉菌總數的測定，所用的培養基為高鹽察氏培養基。②根據GB/T 13092-2006飼料中霉菌總數的測定所用的檢測方法。

　　1.2.4產毒菌種類的檢測

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　?、诟鶕礼B/T 4789.16-2003中常見產毒菌的鑒定對菌落進行鑒定

　　1.2.5毒素檢測

　　利用Beacon毒素檢測試劑盒進行飼料中毒素含量的檢測。已提供的試劑與材料有：真空包裝且包含干燥劑的8x12的微孔板；5瓶濃度分別為0、2.0、4.0、10、25ug/kg的霉菌毒素標準品；1瓶酶標記物；1瓶底物溶液；1瓶停止液。

　　1.2.5.1提取液的制備將80ml甲醇和20ml蒸餾水置于錐形瓶中，震蕩搖勻。

　　1.2.5.2樣品制備

　　粉碎好的樣品過20目篩，稱取50g樣品和50g氯化鈉置于帶塞錐形瓶中，并向其中加入100ml甲醇水(80：20)提取液，搖勻，靜置2-3min時樣品沉淀，然后用玻璃纖維濾紙過濾10ml萃取液，取5ml萃取液用20ml水稀釋，過濾稀釋液待測。

　　1.2.5.3檢測程序

　　先將毒素標準品溶液(已提供)及樣品液加入測試孔中，然后向測試孔中加入毒素的酶標記物，樣品及酶標記物競爭結合連接在微孔上的抗體，10min培養后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未結合的霉菌毒素和酶標記物。加入無色的底物溶液，培養10min，所有結合的酶標記物使底物轉化成藍色物質。加入停止液，然后將測試孔放在酶標儀上讀取吸光度值，未知濃度樣品與標準吸光度值進行比較，就可以得到樣品的霉菌毒素（黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A）的濃度。

　　2 結果與分析

　　2.1霉菌總數的檢測(見表2)

　　由表2可知，相對濕度（65+2）%的條件下，霉菌孢子很難萌發，繁殖較慢，在保質期內霉菌總數沒有超過允許限量，飼料不會發生霉變，飼料營養不會受到霉菌的破壞。在高溫、高濕的條件下，在生產后的2周內霉菌總數達到7.7x10⁵cfu/g，超過標準限量（10⁵cfu/g）。

　　2.2產毒菌種類的鑒定(見表3)

　　由表3可知，高溫、高濕條件下主要產毒菌菌屬有曲霉、青霉，其中黃曲霉、寄生曲霉、綠青霉較多。

　　2.3 霉菌毒素含量的檢測（見表4)

　　由表4可知，在高溫、高濕條件下生產后的35d黃曲霉毒素含量為20.8ug/kg，超過國家安全限量20ug/kg應禁止飼用。而存放56d后，赭曲霉毒素含量為52.1μg/kg，沒有超過國家安全限量100ug/kg，但飼料還是不宜飼用。

　　2.4 霉菌毒素隨貯存時間的變化情況（見圖2)

　　由圖2得知，將飼料按照要求存放在陰涼通風干燥的地方，毒素含量變化很小，在保質期內不會超過安全限量。在高溫、高濕的條件下赭曲霉毒素A含量增加速度比黃曲霉毒素B₁的速度快，黃曲霉毒素B₁在一個月左右就超過允許限量。

　　3 討論

　　不同貯存條件對飼料質量有不同的影響，這主要是與飼料中霉菌總數及霉菌毒素含量有關。中華人民共和國飼料衛生標準規定飼料中霉菌總數含量不超過10⁵cfu/g。黃曲霉毒素安全限量為20ug/kg，赭曲霉毒素含量不超過100ug/kg^[9-10]。試驗表明，在標準貯存條件下（低溫干燥)，霉菌總數和毒素含量變化較小，在保質期內不會超過國家限量標準。而在高溫、高濕的條件下，霉菌總數和毒素含量變化顯著，在生產后的2周內霉菌總數達到7.7X10⁵cfu/g，超過標準限量，主要產毒菌有黃曲霉、寄生曲霉、綠青霉；在生產后的35d，黃曲霉毒素含量為20.8ug/kg，超過國家安全限量20ug/kg禁止飼用。而赭曲霉毒素存放56d含量為52.1ug/kg，沒有超過國家安全限量100ug/kg。在高溫、高濕的條件下赭曲霉毒素含量增加速度比黃曲霉毒素的速度快，但只要有一種霉菌毒素含量超過國家規定的限量標準，此飼料就不宜使用。

　　4 結論

　　飼料貯存在高溫、高濕的條件下前2周不用添加防霉劑，而在生產后第3周應該添加防霉劑或采取其它有效的防霉措施限制霉菌的迅速增長^[11]。另外，飼料保質期的長短還與飼料貯存環境的空氣中飛揚的霉菌孢子數及生產飼料的原料中含有的孢子數有關。要重視和加強糧食貯藏科研；要研究不同貯藏條件和不同儲藏措施對稻谷霉菌的影響：要研究現有防霉劑的合理使用技術；要不斷探討與生物防霉新技術；最后，還要建立科學合理的霉菌監測指標體系，應該建立HACCP體系找到關鍵控制點，使飼料的防科學化、系統化、規范化^[12，13]。