摘要：本試驗研究了88株自雛雞腸道分離出的乳酸菌的產酸能力，以及對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑菌效果。研究表明，乳酸菌的產酸能力確實對其抑菌能力有一定影響。本次共從88株乳酸菌中篩選出了7株對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌均有較好抑制作用，4株對大腸桿菌有顯著抑制作用，但對沙門氏菌抑制能力一般的乳酸菌，這11株菌均有較好產酸能力?！　?br />      20世紀40年代以來，在畜牧業生產中，抗生素有著廣泛的應用，尤其在畜禽疾病防治方面，起到了巨大作用。但近年來，人們越來越重視到濫用飼用抗生素的弊端。抗生素替代品的研發已勢在必行[1]，微生態制劑安全環保、無殘留、無毒副作用，成為飼用抗生素的最佳替代品。乳酸菌制劑是其中效果較好的一種，在飼料工業中得到了廣泛應用[2.3]。

　　在畜禽腸道中生存著大量的微生物，據估計，胃腸道內大約有1014的微生物[4]，一些共生微生物可幫助不易消化的營養物質的吸收利用，一些能分泌抗菌物質，阻止病原微生物過度繁殖和定植。這些微生物菌群的穩定與否直接關系到畜禽的健康和生長[5]。乳酸菌作為畜禽腸道中常見的有益優勢菌群，可以提高飼料轉化率，促進動物增重，并減少動物發病率[6.7]。本研究通過分析88株乳酸菌的產酸能力及抑菌能力，初步篩選出有良好的應用前景的乳酸菌，以期在畜牧業生產中發揮作用。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 菌株

　　88株乳酸菌(R01-R88)：由好實沃生物研發中心從雛雞腸道中分離得到。

　　1.1.2 指示菌

　　大腸桿菌D101.金黃色葡萄球菌E101.沙門氏菌F101：均由好實沃生物研發中心提供。

　　1.1.3 培養基

　　MRS培養基：葡萄糖20g;蛋白胨10g;牛肉膏10g;酵母膏5g;乙酸鈉5g;磷酸氫二鉀2g;檸檬酸氫二銨2g;硫酸鎂0.58g;硫酸錳0.25g;吐溫-80 1mL;1000mL蒸餾水。用1mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH至7.2.115℃滅菌30min。固體培養基在液體培養基的基礎上加入1.6%的瓊脂。

　　NA培養基：蛋白胨10g，牛肉膏3g;氯化鈉5g;1000mL蒸餾水。用1mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH至7.2.121℃滅菌20min。

　　1.1.4 儀器和設備

　　PB-10型數字酸度計：德國賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;HZC-250型恒溫振蕩培養箱：江蘇省太倉市實驗設備廠;HYG-A全溫搖瓶柜：太倉市實驗設備廠;超凈工作臺SW-CG-1FD：蘇州安泰空氣技術有限公司;YS100雙目顯微鏡：日本Nikon公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 指示菌活化

　　取出甘油管保藏的三種指示菌(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌)，以無菌操作在NA平板上分別劃線分離純化，于37℃培養24~48h。從平板上挑取單菌落，接種于50mL NA液體培養基中，37℃，180r/min震蕩培養18~20h，得指示菌菌懸液。

　　1.2.2 產酸能力測定

　　無菌操作下，將88株乳酸菌在MRS平板上分離純化，37℃培養48h以上。從平板上挑取單菌落，接種至50mLMRS液體培養基中，37℃，180r/min震蕩培養20~22h，測定pH值，以判斷乳酸菌產酸能力。

　　1.2.3 對指示菌抑菌效果測定

　　無菌操作下，將88株乳酸菌在MRS平板上分離純化，37℃培養48h以上。選取劃線均勻，菌體生長密集處，用打孔器作出菌餅。將制好的菌餅均勻放在薄MRS平板上，將病原菌菌懸液與冷卻至45℃左右的NA固體培養基以1:9混合，搖勻后傾注至已放置好菌餅的薄MRS平板，37℃培養兩天后，觀察各菌株對致病菌的抑菌效果。

　　2 結果和分析

　　2.1 乳酸菌產酸能力

　　88株乳酸菌的產酸能力如表1所示，pH值范圍在在4.55~5.42之間。其中：pH4.65以下(含)的有29株;pH4.66~4.85之間的有50株;pH4.85~5.00之間的有0株;pH5.0以上(含)的有9株(R02、R03、R09、R16、R56、R57、R59、R63、R87)。平均pH值為4.72.可以看出，除pH>5.0的9株菌外，剩余79株菌均有較好的產酸能力，且產酸能力較為平均。

　　表1 88株乳酸菌產酸試驗結果

　　88株乳酸菌的產酸能力如表1所示，pH值范圍在在4.55~5.42之間。其中：pH4.65以下(含)的有29株;pH4.66~4.85之間的有50株;pH4.85~5.00之間的有0株;pH5.0以上(含)的有9株(R02、R03、R09、R16、R56、R57、R59、R63、R87)。平均pH值為4.72.可以看出，除pH>5.0的9株菌外，剩余79株菌均有較好的產酸能力，且產酸能力較為平均。

　　2.2 對指示菌的抑菌效果

　　表2 88株乳酸菌對指示菌的抑制效果　　

　　注：表中，-表示無抑菌效果，+代表有抑制效果，+越多表示抑菌效果越好。

　　88株乳酸菌對三種指示菌的抑菌效果如表2所示，可以看出：R12、R13的抑菌效果最好，對三種指示菌均有較好的抑菌效果，且對F101的抑制效果尤為明顯;R11、R65、R69、R70、R84對三種指示菌亦有較好的抑制效果;R45對D101、E101有較好的抑制效果，但對F101的抑菌能力較弱;R04、R43、R44對D101的抑制效果極為顯著，但對E101、F101的抑菌能力較弱。此11株菌均有較好的抑菌能力，可以進行下一步研究使用。表3為11株菌的產酸能力對比。

　　表3 抑菌效果良好11株乳酸菌產酸能力對比

　　從表3種可以看出：抑菌效果較好的11株乳酸菌產酸能力也較好，除R45為4.84外，其余10株菌的pH值均在平均產酸能力4.72以下。

　　表4 9株產酸能力較差的乳酸菌抑菌效果對比

　　從表4種可以看出：產酸能力較差的9株菌，抑菌效果也并不理想。尤其是對D101.9株中有6株未表現出明顯的抑制效果，剩余3株對D101的抑制效果也很微弱。

　　3 討論

　　從本研究結果可以看出：乳酸菌的產酸能力對其抑制病原菌的能力有一定影響。乳酸菌產生的有機酸可有效降低動物腸道內的pH值，使腸道處于酸性環境，阻止大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌等病原菌在動物腸道內的定植，并抑制其生長，從而防治畜禽相應疾病的發生[8]。但本研究也有部分產酸能力很好的菌株抑菌效果也很差(如R47)，而產酸能力較差菌卻對某種病原菌有很好的抑制效果(如R56對F101)，可見乳酸菌的抑菌作用并不是完全來源于其代謝過程中的有機酸。有報道表明，乳酸菌除有機酸外，還有其他代謝產物有抑菌作用，如過氧化氫、細菌素等[9]。

　　4 結論

　　研究表明乳酸菌對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌確實有抑制作用，且其代謝產生的有機酸對乳酸菌抑制病原菌的效果確有一定影響，但不同的乳酸菌對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌表現出不同的抑制效果。本研究共篩選出2株對三種病原菌均有良好抑制效果，對沙門氏菌抑制效果顯著的乳酸菌;5株對三種病原菌均有良好抑制效果的乳酸菌，以及4株對大腸桿菌有顯著抑制效果，但對沙門氏菌抑制效果一般的乳酸菌，著11株乳酸菌均有較好的產酸能力。后續還要對此11株菌的抗逆性、藥敏性等進行研究，以進一步篩選優良菌株，在畜牧業生產中發揮效用。

　　參考文獻：略