大豆制品中尿素酶活性測定方法

　　GB/T 8622-1988

　　1　適用范圍

　　本標準適用于由大豆制得的產品和副產品中尿酶活性的測定。本法可確認大豆的濕熱處理程度。

　　2　定義

　　本標準所指尿素酶活性定義如下：

　　在（30±0.5）℃和pH7的條件下，每分鐘每克大豆制品分解尿素所釋放的氨態氮的毫克數。

　　3　原理

　　將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解產生氨的反應。用過量鹽酸中和所產生的氨，再用氫氧化鈉標準溶液回滴。

　　4　儀器設備

　　4.1　樣品篩：孔徑200?m；

　　4.2　酸度計：精度0.02pH，附有磁力攪拌器和滴定裝置；

　　4.3　恒溫水浴：可控溫（30±0.5）℃；

　　4.4　試管：直徑18mm，長150mm，有磨口塞子；

　　4.5　精密計時器；

　　4.6　粉碎機：粉碎時應不生強熱（例如球磨機）

　　4.7　分析天平：感量0.0001g；

　　4.8　移液管：10mL。

　　5　試劑和溶液

　　5.1　尿素：分析純；

　　5.2　磷酸氫二鈉：分析純；

　　5.3　磷酸二氫鉀：分析純；

　　5.4　尿素緩沖溶液（pH6.9至7.0）：4.45g磷酸氫二鈉和3.40g磷酸二氫鉀溶于水并稀釋至1000mL，再將30g尿素溶在此緩沖溶液中，可保存1個月。

　　5.5　鹽酸：分析純，c（HCL）=0.1mol/L溶液；

　　5.6　氫氧化鈉：分析純，c（NaOH）=0.1mol/L標準溶液。

　　6　試樣的制備

　　用粉碎機將10g試樣粉碎，使之全部通過樣品篩。對特殊試樣（水分或揮發物含量較高而無法粉碎的產品）應先在實驗室溫度下進行預干燥，再進行粉碎，當計算結果時應將干燥失重計算在內。

　　7　測定步驟

　　稱取約0.2g已粉碎的試樣，稱準至0.1mg，轉入試管中（如活性很高只稱0.05g試樣）,移入10mL尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇烈搖動，馬上置于（30±0.5）℃恒溫水浴中，準確計時保持30min。即刻移入10mL鹽酸溶液，迅速冷卻到20℃。將試管內容物全部轉入燒杯，用5mL水沖洗試管兩次，立即用氫氧化鈉標準溶液滴定至pH4.70。

　　另取試管作空白試驗，移入10mL尿素緩沖液，10mL鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當的試樣，也稱準至0.1mg，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動。將試管置于（30±0.5）℃的恒溫水浴，同樣準確保持30min，冷卻至20℃，將試管內容物全部轉入燒杯，用5mL水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標準溶液滴定至pH4.70。

　　8　測定結果的計算

　　8.1　計算方法

　　以每分鐘每克大豆制品釋放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式計算：

　　式中：

　　c ——氫氧化鈉標準溶液濃度，mol/L；

　　V0 ——空白試驗消耗氫氧化鈉溶液體積，mL；

　　V ——測定試樣消耗氫氧化鈉溶液體積，mL；

　　m ——試樣質量，g。

　　注：若試樣經粉碎前的預干燥處理時，則

　　式中：

　　S——預干燥時試樣失重的百分率。

　　8.2　重復性

　　同一分析人員用相同方法，同時或連續兩次測定結果之差不超過平均值的10%，以其算術平均值報告結果。