耐熱霉菌測定法（引自可口可樂熱充填之監控和品控要求手冊）

1.目的：運用該程序測定在果汁或其它同類產品中是否有耐熱霉菌的存在

2.培養基和試劑

酵母提取液

3.設備和儀器

恒溫水浴(77℃士l.0℃) 稱重皿吸液管，

培養箱(30℃士l.0℃) 20目濾格

標準稀稀瓶(玻璃，99ml) 1.5升燒瓶

托盤天平(0.1g) 10.0ml刻度吸管 磁力攪拌器

4.操作步驟

4.1準備稀釋空白樣：

4.1.1 用托盤天平稱取20克酵母提取液于稱重皿。

4.1.2 往1.5升燒瓶內注入980毫升水。

4.1.3再往燒瓶內加入20克提取液。

4.1.4用磁力攪拌器攪拌10分鐘。

4.1.5分取50毫升溶液到99毫升的玻璃稀釋瓶，蓋緊。

4.1.6放入高溫滅菌釜，在120℃保持25分鐘

4.1.7冷卻至室溫并儲存。

注意：稀釋空白樣有一年有效保存期

4.2準備樣品

4.2.1 那么就用移液管取10ml樣品加入經滅菌之酵提取液中(25ml)，并蓋緊。

4.2.2樣品的熱處理：

4.2.2.1開啟恒溫水浴，設定控制溫度到77℃，并讓水浴加熱至設定溫度。

4.2.2.2將樣品和空白放置入水浴保持30分鐘。(另取一瓶子放入溫度計來確定溫度已到達要求，然后開始計時)

4.2.2.3保持時間結束后，移出樣品并讓其冷卻至室溫。

4.2.3樣品培養

4.2.3.1將樣品放入培養箱，在30℃下放置四星期。

4.2.3.2每星期觀察霉菌生長情況。

4.2.3.3通過聞味和嘗味來檢查每個樣品是否有明顯的發酵。

4.2.3.4在第四周末，傾倒樣品使之通過20目濾格并尋找霉菌，霉菌可能是長在液體表面的“絨毛狀”物體或濾格上“果凍狀”物體。