橙血清傾倒平板法微生物測試（引自可口可樂熱充填之監控和品控要求手冊）

1.培養基和試劑：

a)異丙醇

b)預配好和已消毒的10％酒石酸溶液

c)橙血清瓊脂（OSA）

2.設備和儀器

a)消毒處理過的塑料吸管或消毒過的玻璃吸管，或消毒處理過的注射器(帶針頭的)

b)己消毒的有蓋培養皿。

c)可維持溫度在44℃—46℃的恒溫水浴鍋。

d)可維持溫度在28C+/一1.0℃(Y&M)和35r+/一1.0℃(Tc)的培養箱

e)已消毒的注射器，10cc

f）一次性的塑料注射過濾器

3.操作步驟：

3.1.準備培養基

3.1.1粉劑無水橙血清瓊脂應按照制造商的指示進行準備。按照每升橙血清瓊脂加入己消毒的約等于14毫升10％的酒石酸的比率，酒石酸必須以無污染的方法加入以消毒的橙血清瓊脂(最后的PH值需要在3.6—4.0之間)。最簡單的方法是用一個一次性已消毒的注射器來做。在把橙血清瓊脂從44℃—46℃的恒溫水浴取出后，打開一個一次性已消毒的注射器，吸取10％的酒石酸到注射器，注射10％的酒石酸到培養基中。

3.2樣品測試

3.2.1將已經于30℃環境下培養的樣品取出并放置到微生物實驗室。

3.2.2用酒精燈擦拭工作臺。要注意任何明火，如火爐。酒精是非常易燃的液體。

3.2.3開一包已消毒的有蓋培養皿并將平板安排放置于工作臺上。

3.2.4在每個平板底部寫上樣品的標識符號。即使平板掉落并且蓋子飛出，每個平板的標識也不會被遺失。

3.2.5對每個樣品用一個新的吸管。

3.2.6接從每個樣品中以無菌的方法取出樣品并移至有蓋培養皿。以無污染

3.2.7將以消毒的、融解的橙血清瓊脂培養基（12~20ml,最高溫度=46℃）倒入有蓋的培養皿

3.2.8輕輕的晃動以徹底混合培養基和樣品?；旌衔锊灰獜呐囵B皿的邊緣濺出。

3.2.9讓混合物在一個水平面凝固10分鐘。

3.3平板培養

3.3.1平板凝固后，倒轉平板以防止平扳表面覆蓋的水汽凝結滴落而散布菌落。

3.3.2平板要在28℃十／——1.0℃(Y＆M)和35℃十／—1.0℃(T&C)的環境下培養。

4.菌落計數

4.1總菌數：必須分別在培養24小時和72小時后計算菌數。點計所有菌落（不管類型），并記錄最高數目。

4.2酵母菌和霉菌數：在培養48小時后點計酵母菌和霉菌數，并在此后每隔24小時再點計一次，直到過第5天，記錄最高數目。

酵母菌通常為圓形的白色菌落。有時它們也帶有顏色。在一天至兩天以后，一些酵母菌菌落的中心因吸收培養劑中指示劑而變成藍色。

霉菌菌落會顯示不同的顏色（包括白色、黃色、紅色、藍色、或黑色），但從其“絨毛狀”或“棉花狀”外觀很容易辨認這種菌落。通常，霉菌菌落比細菌或酵母菌的菌落為大。

4.3大腸桿菌數：大腸桿菌菌落呈綠色或墨綠色，并有明顯的金屬光澤。在培養24小時后，只計算有金屬光澤的菌落。

注：橙血清瓊脂上，酵母菌和細菌是無法用肉眼分別的。故除非借助顯微鏡，除霉菌之外都當酵母菌計。大腸菌群的顏色是紅色的。